مطالعه تأثیرات ضد ویروسی گروهی از آنابناها و لپتولینگبیا های جدا شده از نواحی جنوب ایران

توضیحات

چکیده
سیانوباکتری ها دارای توزیعی جهانی هستند. آنها دارای قابلیت های با ارزشی برای کاربرد به عنوان دارو، یا در زمینه کشاورزی و یا بازیابی آب های هرز می باشند. به علاوه آنها طیف وسیعی از متاولیت های ثانویه را تولید می کنند که برای رشدشان مورد نیاز نیستند ولی دارای فعالیت های بیولوژیک قوی می باشند مثل فعالیت های ضد ویروسی ، ضد باکتریایی و ضد قارچی، ضد مالاریایی، ضد توموری و ضد التهابی که برای استفاده های درمانی مفید می باشند. در پژوهش حاضر نیز فعالیت ضد ویروسی سیانوباکتری های جمع آوری شده از مناطق آلوده به نفت جنوب ایران، مورد بررسی قرار گرفته است.
روش کار: در این پژوهش عصاره آبی و متانولی سیانوباکتری های Leptolyngbya  ISC 40 , Anabaena ISC 90   Anabaena ISC 88, Anabaena ISC 55   و  Leptolyngbya ISC 25تهیه شد. تاثیرات سایتوتوکسیک آن ها بر روی رده های سلولی Hela, LCL وL 929  به وسیله تست MTT  مورد ارزیابی قرار گرفت. برای بررسی تاثیرات ضد ویروسی، ابتدا عصاره ها به سلول های  LCL  و HeLa  که به ترتیب دارای ویروس هایEBV  و HPV  می باشند اثر داده شد. سپس استخراج DNA و تست PCR برای ناحیه ژنی مسئول کد کردن پوشش ویروس انجام شد.
 نتایج نشان داد که عصاره ها دارای تاثیرات سایتوتوکسیک بر رویLCL  و HeLa بودند. به علاوه عصاره های مورد مطالعه، LOAD  ویروس را به طور معنی دار کاهش دادند.     

کلمات کلیدی: سیانوباکتری، ویروس، سایتوتوکسیسیتی.

فهرست مطالب
عنوان                                                                                                                                 
چکیده    1
مقدمه : تاریخچه سیانوباکتری ها    3
فصل اول: کلیات
۱-۱- سلول سیانوباکتری    5
1-1-1- حرکت در سیانوباکتری    6
1-1-2- غشا سلولی سیانوباکتری    7
1-1-3- تیلاکوئیدها در سیانوباکتری    7
1-1-4- فیکوبیلی زوم ها در سیانوباکتری    8
1-1-5- میان یاخته مرکزی سیانوباکتری    8
1-1-6- سیانوفیسین در سیانوباکتری    9
1-1-7- تکثیر در سیانوباکتری ها    10
1-1-8- ترکیبات موثر موجود در سیانوباکتری ها    11
1-1-9- مورفولوژی در سیانوباکتری ها    13
1-1-10- تقسیمات شاخه سیانوباکتری ها    14
1-1-10-1- رده سیانوفیسه    15
1-1-10-1-1- راسته Chroococcales    15
1-1-10-1-2- راسته Pleurocapsales    15
1-1-10-1-3- راسته Oscillatoriales    15
1-1-10-1-4- راسته Nostocales    16
1-1-10-1-5- راسته Stigonematales    16
1-1-10-2- رده پروکلروفیسه    16
1-2- ویروس های تومورزا و عوامل سرطان زا    17
1-2-1- خصوصیات کلی کارسینوژنز ویروسی    18
1-2-1-1- کارسینوژنز چند مرحله ای    18
1-2-2- فعالیت انواع ویروس های تومورزا    20
1-2-3- واکنش متقابل ویروس های تومورزا با سلول میزبان    21
1-2-4- ویروس های تومورزای RNA دار (رترو ویروس ها)    25
1-2-4-1- قدرت تومورزایی رترو ویروس ها    26
1-2-4-2- رترو ویروس های انسانی    26
1-2-5- آنکوژن های سلولی    28
1-2-6- تقسیم بندی آنکوژن ها    28
1-2-6-1- مکانیسم فعال شدن آنکوژن    29
1-2-6-2- نقش آنکوژن ها در سرطان    32
1-2-7- ژن های سرکوب گر تومور    32
1-2-8- ویروس های تومورزای DNA دار    33
1-2-9- آدنو ویروس ها    39
1-2-10- هرپس ویروس ها    39
1-2-11- پاکس ویروس ها    42
1-2-12- ویروس هپاتیت B    43
1-3- پاپیلوما ویروس های انسانی (HPV)    45
1-3-1- تکثیر پاپیلوما ویروس    46
1-3-2- مکانیسم بیماری زایی و آسیب شناسی    46
1-3-3- یافته های بالینی و اپیدمیولوژی    48
1-3-4- پیشگیری و کنترل    50
1-4- اپشتین بار ویروس(EBV)    50
1-4-1- خصوصیات ویروس    50
1-4-2- آسیب شناسی و آسیب زایی    54
1-4-3- یافته های بالینی    56
1-4-4- ایمنی    58
1-4-5- تشخیص آزمایشگاهی    58
1-4-6- همه گیر شناسی    60
1-4-7- پیشگیری، درمان و کنترل    61
1-5- پیشگیری و درمان عفونت های ویروسی    62
1-5-1- شیمی درمانی ضد ویروسی    62
1-5-3- واکسن های ویروسی    71
1-6- نانو ذرات    77
1-6-1- کاربردهای نانوذرات در پزشکی    78
1-6-2- انو اع نانو ذرات    78
1-6-3- تاثیر سایز و شکل روی فعالیت آنتی میکروبی نانوذرات    79
1-6-4- مکانیسم های ضد میکروبی نانو    79
1-6-5- فاکتورهای مهم در ایجاد سایتوتوکسیسیتی ناشی از نانو ذرات    80
1-6-6- مکانیسم ایجاد سمیت در سلول ها    80
1-7- هدف از این مطالعه :    80
فصل دوم: مواد و روش کار
۲-۱- دستگاه ها، وسایل و مواد مورد استفاده    82
2-2-1- بخش فیزیولوژی    86
2-2-1-1- تهیه سویه های سیانوباکتری    86
2-2-1-2- کشت سویه ها و تکثیر آنها    87
2-2-1-3- تهیه عصاره آبی سیانوباکتری    89
2-2-1-4- تهیه عصاره متانولی سیانوباکتری    90
2-2-2- بخش مولکولی    90
2-2-2-1- معرفی و کشت رده های سلولی انسان    90
2-2-2-2- تهیه محیط کشت ۱۶۴۰ RPMI    91
2-2-2-3- کونژوگه کردن نانوذرات بوسیله ترکیبات استخراج شده    92
2-2-2-4- کشت در داخل پلیت ۹۶ خانه    92
2-2-2-4-1- تاثیر بر سلولها    93
2-2-2-4-2- بررسی سایتوتوکسیسیتی به وسیله سنجش M.T.T    93
2-2-2-4-3- اساس تست   MTT    94
2-2-2-4-4- طرز تهیه محلول MTT    94
2-2-2-4-5- انجام تست MTT    95
2-2-2-5- استخراج DNA ژنومی    96
2-2-2-6- واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)    98
2-2-2-6-1- طراحی پرایمر    99
2-2-2-6-2- آماده سازی پرایمرها    101
2-2-2-6-3- دی اکسی نوکلئوزید تری فسفات (dNTP)    101
2-2-2-6-4- مارکر DNA    101
2-2-2-6-5- شناسایی پرایمر    101
2-2-2-6-6- روش کار PCR    102
2-2-2-7- الکتروفورز بر روی ژل آگارز جهت بررسی محصولات PCR    104
2-2-2-7-1- روش کار    105
2-2-2-8- تست کلون زایی    106
فصل سوم: نتایج
۳-۱- نتایج حاصل از کشت سیانوباکتری    109
3-1-1- عکس ماکروسکوپی نمونه ها:    109
3-1-2- عکس میکروسکوپی نمونه ها:    111
3-2- نتایج حاصل از کشت سلول های انسانی    113
3-3- نتایج حاصل از بررسی تست سایتوتوکسیسیتی    115
3-3-1- نتایج حاصل از تست سایتوتوکسیسیتی عصاره آبی نمونه ها بر روی رده سلولی HeLa:    115
3-3-2- نتایج حاصل از تست سایتوتوکسیسیتی عصاره آبی نمونه ها بر روی رده سلولی LCL:    117
3-3-3- نتایج حاصل از تست سایتوتوکسیسیتی عصاره آبی نمونه ها بر روی رده سلولی L929:    118
3-3-4- نتایج حاصل از تست سایتوتوکسیسیتی عصاره متانولی نمونه ها بر روی رده سلولی HeLa:    119
3-3-5- نتایج حاصل از تست سایتوتوکسیسیتی عصاره متانولی نمونه ها بر روی رده سلولی LCL:    122
3-4- نتایج حاصل از تعیین میزان لود ویروس HPV با عصاره متانولی نمونه های Anabaena 90,55    125
3-5- نتایج حاصل از تعیین میزان لود ویروس EBV با عصاره متانولی نمونه های Anabaena 90,55    127
3-6- نتایج حاصل از تعیین میزان لود ویروس  EBVو HPV با عصاره متانولی نمونه های Anabaena 88 و ۴۰,۲۵ Lepto Lyngbya.    128
3-7- نتایج حاصل از تست کلون زایی    129
3-7-1- نمودار حاصل از تست کلون زایی    129
3-7-2- عکس های میکروسکوپی نمونه ها در توانایی تولید کلنی با لنز ۱۰۰ ×    130
فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری
پیشنهادات:    139
منابع:    140