توضیحات
چکیده
امروزهازآب هایپذیرندهنظیردریاچههاورودخانههابهعنوانمحلیبرایدفعفاضلاب هاوپساب هااستفادهمیشود.ازجملهآلایندههاییکهازطریقدفعپساب هاوفاضلاب هاواردآب های پذیرندهمیشوند،ترکیباتمغذیخصوصاًنیترات هاوفسفات هاهستند. وروداینآلایندههابهمنابعآبی باعثغنیشدنپیکرهآبیبهوسیلهترکیباتمغذیمذکورمی شودکه خودباعثافزایشرشدوتکثیر گیاهانآبزیعلی الخصوصجلبک ها شدهوپدیدهیوتریفیکاسیون را سببمیگردند. درروششیمیاییبااستفادهازموادشیمیاییورسوبدادن،آلایندههاراازمحیطجدامیکنند.این روشاغلبهزینهبروگاهینیزبهدلیلسمیتمواداضافهشدهبهمحیطآسیبواردمیشود. درروشهای بیولوژیکیبااستفادهازمیکروارگانیسمهایجاذبفسفاتودنیتریفیکانتهاحذفاینموادازمحیطصورت میگیرد، کهفسفرحذفشدهازپساببهعنوانپلیفسفاتداخلسلولی در می آید. اینروشبهدلیلهزینهپایین،کمخطربودنورسیدناینموادبهحداستانداردبینالمللیمورد توجهقرارگرفتهاست.
امروزه با افزایش شناخت از میکروارگانیسم ها و پیشترفت علم یکروب شناسی و بیوتکنولوژی استفاده از میکروب ها بعنوان راهبردی، جهت حذف آلاینده های موجود در فاضلاب بخصوص فسفات مطرح می گردد.این مطالعه با هدف جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری های حذف کننده ی فسفات از فاضلاب صنعتی انجام گرفت. در این مطالعه از نمونه های فاضلاب شهرکی صنعتی آق قلا جهت جداسازی باکتری های حذف کننده ی فسفات استفاده شد.در مجموع ۳۰ جدایه با استفاده از محیط اختصاصی seperb وبر پایه ی تشکیل هاله ی شفاف اطراف کلنی ناشی از حذف فسفات موجود در محیط جداسازی شدند. تمامی این جدایه ها تا سطح جنس و گونه با استفاده از کتاب راهنمای شناسایی سیستماتیک باکتریهای برجی (۲۰۰۶) شناسایی مقدماتی شدند.از بین این ۳۰ جدایه، ۳ جنس باکتری با توجه به بزرگتر بودن هاله ی اطراف آنها نشان می داد که فسفات بیشتری را از محیط حذف کردند. شناسایی مولکولی این باکتریها با استفاده از تکنیک PCR بر پایه ژن ۱۶SrRNA نشان داد که این جدایه ها منسوب به ۳ جنس Brevundimonahrobactrum و Exiguobacteriumمی باشند.
کلمات کلیدی: حذف فسفات، فاضلاب صنعتی،محیط کشت
عنوان صفحه
فصـل اول: کلیات تحقیق
۱-۱- فسفر و نقش آن در طبیعت. ۳
۱-۱-۸- برهمکنش فسفر با دیگر عناصر.. ۱۱
۱-۱-۹- مشکلات مصرف زیاد فسفر.. ۱۲
۱-۱-۱۲- مشکلات مصرف زیاد فسفر.. ۱۴
۱-۱-۱۳- راههای جلوگیری از کمبود و بیش بود فسفر.. ۱۴
۱-۱-۱۵- روشهای کاهش تثبیت فسفر.. ۱۶
۱-۴-۱- میزان مواد آلی در فاضلابها.. ۱۸
۱-۴-۲- درجه بندی فاضلاب ها.. ۱۹
۱-۴-۳- فاضلاب های غیر انسانی.. ۱۹
۱-۴-۴- تخلیه بی رویه فاضلاب های صنعتی در آب های سطحی.. ۱۹
۱-۴-۵ مواد شیمیایی، ایجاد کننده اصلی فاضلاب صنعتی.. ۲۰
۱-۴-۶- میکروارگانیسم ها و تصفیه ی فاضلاب ها و محیط زیست.. ۲۱
۱-۴-۷- کاربرد میکروارگانیسم ها در صنعت تصفیه ی فاضلاب ها.. ۲۱
۱-۴-۸ مهمترین عوامل ضرورت عدم تخلیه فاضلابهای صنعتی به آبهای جاری و زیر زمینی.. ۲۲
۱-۵ تصفیه زیستی یا تصفیه بیولوژیکی. ۲۵
۱-۵-۱ روشهای تصفیه زیستی با کمک باکتری های هوازی.. ۲۷
فصـل دوم: سابقه و پیشینه تحقیق
۲-۱- حذف آلاینده ها و فاضلابها. ۳۰
۲-۲- پدیده اوتریفیکاسیون یا یوتریفیکاسیون. ۳۰
۲-۳- اثرات یوتریفیکاسیون بر روی منابع آب قابل استفاده برای انسان 31
۲-۶- ارتباط بین چرخه فسفر و چرخه آهن. ۳۴
۲-۱۰- راندمان حذف فسفر توسط رسوب شیمیایی. ۴۰
۲-۱۱- خصوصیات میکروبیولوژی PAOs:. 41
فصـل سوم: مواد و روشها
۳-۴-۳- آزمون های بیو شیمیایی:.. ۴۹
۳-۴-۳-۳- تولید هیدروژن سولفید و توانایی حرکت.. ۵۱
۳-۴-۳-۷- آزمونOF (Oxidation/Fermentation).. 54
۳-۴-۳-۱۰- هیدرولیز کازئین.. ۵۷
۳-۴-۳-۱۲- شناسایی مولکولی جدایه ها با استفاده از تکنیک PCR.. 58
۳-۴-۳-۱۵- روش تهیه ژل آگارز یکدرصد و الکتروفورز نمونه های ژنومی 61
فصل چهارم : نتایج
۴-۱- جداسازی باکتری های حذف کننده ی فسفات از فاضلاب صنعتی:. ۶۷
۴-۲- شناسایی باکتری های حذف کننده ی فسفات:. ۶۷
۴-۲-۱ آزمون های بیوشیمیایی:.. ۶۸
۴-۳- ارزیابی کمی توان حذف فسفات توسط جدایه های باکتریایی. ۷۱
۴-۴ اندازه گیری هاله حذف فسفات:۷۲
۴-۵- نتیجه ی اندازه گیری هالهها. ۷۳
۴-۷- بررسی مقدار فسفات جذب شده توسط جدایه ها. ۷۵
۴-۸- نتایج مربوط به شناسایی مولکولی باکتری. ۷۷
۴-۸-۱ نتایج کیفی و کمی استخراج DNA.. 77
۴-۸-۲-۱ نتایج تعیین توالی.. ۷۸
فصـل پنجم: بحث
۵-۱- جداسازی و شناسایی باکتری های حذف کننده ی فسفات:. ۹۳
:Brevundimonas diminuta-1-1-5. 93
Ochrobactrum grignonense-2-1-5:.. 93
Exiguobacterium sibiricum-3-1-5:.. 94
۵-۲- خصوصیات جدایه های باکتریایی حذف کننده ی فسفات از فاضلاب صنعتی 95
۵-۳- تخمین کمی حذف فسفات توسط جدایه ها در محیط seperb. 95
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول ۳-۲ لیست مواد محیط کشت.. ۴۷
جدول(۳-۳). ترکیبات محیط نیترات.. ۵۰
جدول (۳-۴). معرف های Aو Bدر محیط نیترات.. ۵۰
جدول(۳-۵) محیط کشتSIM (Hunter and Crecelius،۱۹۳۸).. ۵۱
جدول(۳-۶) ترکیبات محیط سیمون سیترات (Simmons، ۱۹۷۶).. ۵۳
جدول(۳-۷) ترکیبات محیط OF.. 54
جدول(۳-۸) ترکیبات محیط MR / VPبراث (Omeara، ۱۹۳۱).. ۵۶
جدول(۳-۹) ترکیبات محیط نشاسته آگار (Starch Agar).. 56
جدول(۳-۱۰) ترکیبات محیط Skim milk agar (Seeley and Vandemark، ۱۹۷۰).. ۵۷
جدول(۳-۱۱) ترکیبات محیط نوترینت ژلاتین (Blazevic and Ederer، ۱۹۷۵).. ۵۸
جدول(۳-۱۲) ترکیبات محیط کشت LB (Luria and Burrous، ۱۹۹۵).. ۶۰
جدول(۳-۱۳) غلظت مواد برای واکنش PCR.. 63
جدول(۳-۱۴) روش تهیه Master Mix. 64
جدول(۳-۱۵) مشخصات پرایمر Forward.. 64
جدول(۳-۱۶) مشخصات پرایمر Reverse. 64
جدول(۳-۱۷) مشخصات پرایمرهای ۱۶S rRNA.. 64
جدول (۴-۱) نتایج مشاهدات ماکروسکوپی ومیکروسکوپی.. ۶۹
جدول(۴-۲). نتایج آزمون های بیوشیمیایی.. ۷۰
جدول (۴-۳)-جدول MacFarland.. 71
جدول (۴-۴) هاله ایجاد شده توسط جدایه ها بر حسب میلیمتر.. ۷۲
جدول ۴-۵- میزان جذب فسفات در دستگاه اسپکتوفتومتری.. ۷۶
جدول (۴-۶). نتیج حاصل از کرومس.. ۷۸
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار ۴-۱ نموداربیشترین میزان حذف فسفات.. ۷۳
نمودار (۴-۲) بررسی هاله ایجاد شده بر حسب میلیمتر.. ۷۴
نمودار (۴-۳) بررسی هاله ایجاد شده بر حسب میلیمتر.. ۷۵
نمودار (۴-۴) بررسی هاله ایجاد شده بر حسب میلیمتر.. ۷۵
نمودار ۴-۵- میزان جذب فسفات.. ۷۶
فهرست اشکال
عنوان صفحه
شکل (۳-۱) محیط پایه seperb. 47
شکل(۳-۲) هاله ی ایجاد شده در محیط seperbبر اثر مصرف فسفات.. ۴۸
شکل(۳-۳) واکنش گرم جدایه ها.. ۴۹
شکل(۳-۴)عدم تولید هیدروژن سولفید و توانایی حرکت.. ۵۱
شکل(۳-۱۰) آزمون تجزیه ژلاتین.. ۵۷
شکل ۳-۱۱٫کیت استخراج DNAشرکت سیناژن.. ۶۰
شکل(۴-۱) جدا سازی باکتری های حذف کننده ی فسفات در محیط کشت seperb 67
شکل) ۴-۴)هاله ایجاد شده توسط جدایه ها در محیط seperb. 73
شکل (۴-۵).نتایج حاصل از PCR.. 78
شکل (۴-۶) توالی نوکلئوتیدی جدایه PRB9. 80
PRB9جدایه ۱۶S rRNA شکل(۴-۷).سکانس ژنی.. ۸۱
شکل(۴-۸). توالی نوکلئوتیدی جدایه PRB11. 82
شکل (۴-۱۰). توالی نوکلئوتیدی جدایه PRB15. 85
شکل(۴-۱۱).سکانس ژنی ۱۶S rRNAجدایه PRB15. 87
شکل(۴-۱۲).توالی نوکلئوتیدی جدایه PRB30. 88
شکل(۴-۱۳). سکانس ژنی ۱۶s rRNAجدایه PRB30. 90
seperb
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.