توضیحات
چکیده
نوترکیبی همسان فرایندی است که در آن میتوان به تحریک ژنهای خاصی اقدام نمود که در نهایت با عملکرد جدید این ژنها میتوان یک ارگانیسم را به تولید یا عدم تولید یک پروتئین خاص وادار نمود. در حال حاضر تحقیقات گوناگونی وجود دارد که در آنها از نوترکیببی همسان استفاده میشود. هرچقدر این روشها بهینهتر گردند، مسلما فرایندهای اقدامات آزمایشگاهی را تسهیل خواهد نمود، در نوترکیبی همسان قطعه ای از محصول PCR به داخل کروموزوم باکتری وارد شده و با استفاده از وکتورهای λ-Redقادرخواهیم بود که ژن recA را در میزبان تحریک کرده ونوترکیبی همسان را به انجام برسانیم. درمطالعات قبلی نشان داده شده است که طول توالیهای انتهایی(flank) دو سر انتهای محصولPCR نقش مهمی در انجام نوترکیبی همسان دارد، ولی انتخاب طول flank طبق قاعده و قانون خاصی نیست و محقق باید بصورت آزمون و خطا این طول را انتخاب نماید. در مطالعات انجام شده بر سویه های استاندارد، طول این flank میتواند از ۵۰ تا ۲۰۰۰ جفت باز متغیر می باشد.
در این مطالعه ابتدا باکتری های استاندارد dysentrieae Shigella,E.coli, Vibrio Choleraeدر محیط غذایی کشت داده میشود و سپس کلنی مساوی از هر یک از باکتری ها را انتخاب و جهت استخراج totalRNA به کار میرود. پس از تهیه total RNA آن را تبدیل به total cDNA می کنیم،. جهت تعیین وارزیابی بیان ژن l-Redاز تکنیک Real-timePCR با استفاده از SYBR greenІ و روش Relative استفاده نموده و میزان بیان ژنهای l-Redرا در هر میزبان به دست خواهد داد.ژنهای l-Red ومیزان بیان آن در میزبان های متفاوت متغیر بوده و قطعا با ارزیابی بیان آن
می توان تا حدود زیادی طول مناسب را جهت نوترکیبی همسان تعیین کرد. در آن پایان نامه تلاش میگردد تا فرایند انجام نوترکیبی همسان در سویه های باکتری dysentrieae Shigella,E.coli, Vibrio Choleraeرا تسهیل نمود. به عبارتی قرار است بررسی گردد آیا نتایج بدست آمده باعث کمک به بهبود فرایند نوترکیبی همسان میشود یا خیر؟ و واضح است که هر چه میزان بیان ژنهای l-Redبیشتر باشد، بازده نوترکیبی همسان با طول کمتر flank نیز میسرتر است.
واژگان کلیدی: نوترکیبی همولوگ، ژن l-Red، dysentrieaeShigella,E.coli, Vibrio Cholerae
فهرست مطالب
عنوان صفحه
۱-۴-۲ تهیه ی نسخه های متعدد از یک ژن. ۱۰
۱-۴-۳ مراحل آزمایشگاهی PCR.. 10
۱-۵-۱کاربردهای Real Time PCR.. 11
۱-۵-۲ اصول کارReal Time PCR.. 12
۱-۵-۳روش کار Real Time PCR.. 12
۱-۵-۴ آنالیزهای کمی در Real time PCR.. 13
۱-۵-۵ روش منحنی استاندارد(مقایسه مطلق)۱۳
۱-۵-۶ روش آستانه نسبی(مقایسه نسبی)۱۳
۱-۶-۲ تقسیم‌های دوتایی و پیاپی E.coli15
۱-۶-۴ تشخیص آزمایشگاهی باکتری E.coli16
۱-۷-۱ تشخیص آزمایشگاهی باکتری Shigella. 16
۱-۸-۱ شناسایی و طبقه بندی.. ۱۸
۱-۸-۳ عوامل موثر در بیماری زایی.. ۱۹
۱-۸-۴-۱واکنش بر روی محیط TS یا KIA.. 20
۱-۸-۴-۲ تستهای دکربوکسیلاز- دهیدرولاز. ۲۰
۱-۸-۴-۳ تست نیاز به نمک برای رشد. ۲۰
۱-۸-۴-۴ حساسیت به ترکیب ویبریواستاتیک ۱۲۹/O.. 20
۱-۱۱ مراحل رشد و منحنی رشد باکتریها۲۱
۱-۱۲-۱ مرحلهی خفته یا تاخیری (Lag phase)22
۱-۱۲-۲ مرحله ی فعال تکثیر یا رشد و تکثیر لگاریتمی (Logphase)22
۱-۱۲-۳ مرحله ی سکون یا تکثیر کند (Stationary phase)22
۱-۱۲-۴ مرحله ی زوال یا مرگ (Deathphase)23
۱- ۱۴ محاسبه زمان نسل باکتری.. ۲۳
۱-۱۵ شیوه های سنجش تعداد سلول. ۲۴
۲-۱ تاریخچه ترانسفورماسیون. ۲۸
۲-۲ سیستم نوترکیبی مبتنی برλ-Red. 29
۳-۹ Reverse Transcriptase (RT-PCR)36
۳-۹-۱ طراحی پرایمرهای اختصاصی جهتReal-Time PCR.. 36
۳-۹-۲ Real-Time PCR (RT-qPCR)37
۴-۳ تایید پرایمرهای Real-Time PCR.. 45
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.